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Etude de la dessication comme stratégie de décellularisation et de conservation à long terme de lenticules cornéens

La dessication est un processus permettant, de façon strictement contrôlée d’éliminer les molécules d’eau d’un tissu, et d’ainsi permettre sa stabilisation et donc conservation sur le long terme. Nous avons développé et étudié cette méthode de dessication sur des lenticules cornéens. Les indications d’implantation de ce type de lenticule se multiplient, notamment dans des cas de kératocône, kératolyse et presbytie entre autres.

Des lenticules humains issus d’une procédure réfractive SMILE ont été dessiqués, selon un protocole mis au point par notre équipe. Suite à cette dessication, les lenticules sont conservés à température ambiante dans un milieu sec. Ils ont été ensuite réhydratés puis analysés en histologie puis en microscopie électronique afin de s’assurer de leur intégrité micro-architecturale.

Ensuite, six lapins ont été implantés avec ces lenticules dessiqués en inlay dans un pochette stromale découpée manuellement. Leurs cornées ont ensuite été successivement étudiées en OCT et histologie entre 1 et 6 mois.

Après dessication puis réhydratation, les lenticules présentent en coupe histologique avec coloration en hématoxyline/éosine, une structure préservée. Une décellularisation du stroma est aussi observée. En microscopie électronique, l’organisation des lamelles de collagène est satisfaisante, permettant de s’assurer de leur transparence future. Les kératocytes sont lysés.

Dans notre modèle animal xénogénique, aucun rejet clinique ni histologique n’a été mis en évidence, sans aucun traitement immunosuppresseur. Les cornées implantées étaient cliniquement transparentes. Les lenticules sont restés stables en épaisseur (p=0.875). Lors de l’analyse en immunofluorescence, nous avons constaté qu’aucune cellule de l’hôte n’était venue recoloniser les greffons stromaux entre M+1 et M+6.

Les greffons stromaux dessiqués permettent d’obtenir des tissus decellularisés, avec une architecture de collagène préservée. Il reste à établir si les taux de rejet sont diminués avec ces greffons qui présentent une charge antigénique faible. Dans notre modèle animal, aucun infiltrat cellulaire inflammatoire pouvant présager d’un rejet n’a été mis en évidence.

L’implantation de ces stromas dessiqués en inlay permet de façon stable dans le temps d’épaissir une cornée mais le résultat topographique et réfractif de cette implantation reste à être étudié. Nous devons également prolonger la période d’analyse post-opératoire, afin de définir si une recolonisation cellulaire intervient au-delà de 6 mois.

La dessication permet d’obtenir des lenticules cornéens humains décellularisés d’architecture conservée. Leur conservation est simple et envisageable sur plusieurs mois. Cela peut ouvrir la voie à des nouvelles organisations de gestion des greffons, avec le développement de banques de tissus dessiqués, permettant un accès rapide et facilité à ce type de greffon.