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Intérêt de la technique de dessication dirigée sur la sécurité microbiologique des greffons

Nous avons récemment rapporté une technique de dessication dirigée dans la conservation des lenticules de stroma cornéen, dont l’intérêt est grandissant pour des pathologies comme le kératocone. En annexe de ces travaux, nous avons pu mettre en évidence que cette technique entrainait une lyse des membranes cellulaires des kératocytes, rendant ainsi le tissu acellulaire. L’objectif de cette étude était d’évaluer l’effet de cette technique sur d’autres types cellulaires comme des germes microbiens, ce qui permettrait d’augmenter la sécurité des greffons.

Trente-deux cornées à usage scientifique ont été artificiellement contaminées avec un des huit germes décrits à la Pharmacopée (Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Aspergillus brasiliensis, Aspergillus fumigatus, Candida albicans, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Clostridium sporogenes). Chaque cornée était ensuite divisée en trois : un tiers était envoyé directement en bactériologie pour contrôle de la contamination, un tiers dessiqué et un tiers congelé avec cryoprotecteur puis conservés ensuite trois semaines.Chaque fragment a été broyé en flacon à billes sur broyeur Ultra-Turrax® avant ensemencement sur gélose (100µL) pour dénombrement des germes. Les résultats sont rapportés en nombre d’UFC (Unité Formant Colonie).

Les trente-deux fragments frais infectés ont tous présenté une culture positive (entre 100 et 107 UFC/mL). Après trois semaines de dessication dirigée, la culture des fragments était négative (<1UFC/mL) pour B. subtilis, S. aureus, A. brasiliensis, C. albicans, P. aeruginosa et E. coli. Pour Clostridium sporogenes (35UFC/mL) et Aspergillus fumigatus il n’était obtenu qu’une diminution du nombre d’UFC. Après trois semaines de congélation : les cultures étaient négatives (<1UFC) uniquement pour B. subtilis et A. brasiliensis, et une diminution de l’inoculum était observé pour P.aeruginosa et C.sporogenes.

Ces résultats tendent à montrer que la dessication et la congélation ont un rôle dans la destruction des germes avec petit avantage pour la dessication même si la décontamination n’est pas complète.

Notre méthode de dessication dirigée permet de décellulariser le greffon de l’ensemble des cellules du donneur, ce qui présente un avantage immunologique. Cette technique présente l’intérêt supplémentaire de réduire une éventuelle charge microbienne, en augmentant ainsi la sécurité infectieuse du greffon dessiqué.