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112 - Observation d'hamatomes rétiniens dans une lignée de souris KO homozygote conditionnel pour le gène Nf1 dans les cellules capsules frontière

Les mutations du gène NF1 causent la neurofibromatose de type 1. 1 enfant sur 3000 naît avec une altération de ce gène. Les souris dont les 2 gènes Nf1 sont invalidés ont un phénotype létal embryonnaire. Un modèle nouveau de souris avec invalidation des 2 copies du gène Nf1 dans les cellules capsules frontières a été développé récemment. Nous avons cherché à savoir si ces souris présentaient des manifestations oculaires de la Neurofibromatose de type 1

Une lignée de souris recombinante a été développée au moyen d'une construction plaçant sous le contrôle du promoteur du gène Prss56 la Cre recombinase située elle même en amont du Locus Rosa26. Ce locus  contient un codon stop floxé situé en amont de la séquence codante de la protéine fluorescente Tomato. En aval de ce locus Rosa26 modifié se troupe un allèle du gène Nf1 dont l'exon 23 est également floxé. Cet exon 23 est muté chez la plupart des patients atteints de neurofibromatose de type 1. Il code pour le domaine GTPasique extrinsèque de laneurofibromine 1. Nous avons observé des globes oculaires de souris âgées de 6 mois et de 9,6 mois mutées et contrôles.

Nous avons découvert sur des coupes de rétines de souris recombinantes homozygotes Nf1-/- âgées de 9,6 mois des hamartomes rétiniens caractérisées par un immunomarquage de la proteine ki67 (marqueur de prolifération cellulaire) que l'on retrouve dans les couches plexiformes de la rétine. La protéine Tomato est détectée en zone de rétine saine exclusivement dans les cellules de Müller ainsi que dans les astrocytes. Une colocalisation de la Nestine, de la glutamine synthétase et de Tomato a en effet été observée dans les cellules de Müller en zone de rétine saine à l'âge de 9,6 mois et de 6 mois. Enfin, L'ARN messager qui code pour l'acétylcholinestérase est très faiblement exprimé dans la couche nucléaire externe de la neuro-rétine anormale des hamartomes contrairement à ce qui est observé en zone de rétine saine des souris âgées de 9,6 mois. La couche nucléaire externe est épaissie et déformée, la couche plexiforme externe est épaissie considérablement.

Rappelons que l'acétylcholinestérase (AChE) n'est pas seulement une enzyme d'hydrolyse de l'acétylcholine mais également une molécule d'adhésion cellulaire et qu'au moins une de ses isoformes et certains de ses fragments de clivage ont une activité de DNAse proapototique. l'existence de possibles anomalies de prolifération cellulaire et d'adhésion cellulaire constitue un fort argument en faveur du caractère tumoral des masses observées. De surcroît, la présence de nombreuses cellules marquées par la fluorescence rouge émise par la protéine Tomato dans la couche plexiforme externe et dans la couche plexiforme interne de la neuro-rétine des souris âgées de 9,6 mois est également un argument fort en faveur du caractère tumoral des masses neuro-rétiniennes anormales observées. En l'absence de neurofibromine 1 normale codée par les 2 gènes Nf1, les protéines RAS porteuses de GTP ne bénéficient plus de l'activité GTPase extrinsèque de la neurofibromine 1 et leur voie de signalisation est activée, ce qui accélère la prolifération cellulaire. L'AChE fait partie comme NF1 de la voie de signalisation d'ATF2. 

L'étude de nouveau modèle murin nous a permis de confirmer que l'inactivation homozygote du gène Nf1 dans les cellules capsules frontières récapitule nombre des caractéristiques de la neurofibromatose de type 1.